ELISA試劑盒是一種敏感性高，特異性強，重復性好的試驗確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過程看似簡單，但有時還是會出現一些特殊的問題，好比說實驗中背景深全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 根據以往技術分析，可能存在的原因有一下幾條：
1、樣品稀釋液污染
解決辦法：棄去稀釋液，重新配置；
2、不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間）
解決辦法：zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。*按照說明書要求；
3、吸頭重復使用，未洗凈或消毒不*
解決辦法：吸頭盡可能一次性使用；
4、偶聯抗體（streptavidin-HRP）濃度過高
解決辦法：按照說明書調整到合適的濃度；
5、ELISA板子不正確的貯存
解決辦法：酶標板貯存于2-8 ℃；使用結合力低點的Elisa板；
6、實驗過程中洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留
解決辦法：洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染；
7、沒有正確封閉
解決辦法：在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間；
8、底物污染，未避光保存，出現顏色
解決辦法：棄去底物，重新配置；
9、樣本溶血嚴重
解決辦法：建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。
