內毒素ELISA檢測試劑盒是一種用于體外定量檢測生物樣本中內毒素（ET）濃度的工具，在科研和醫(yī)學診斷領域應用廣泛。該試劑盒多基于雙抗體夾心法或競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗技術。以雙抗體夾心法為例，用純化的內毒素抗體包被微孔板制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內毒素，再與HRP標記的內毒素抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹d洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內毒素呈正相關，用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中內毒素濃度。
（1）試劑平衡
未開封試劑：
從冰箱取出后，室溫平衡30分鐘（具體時間參考說明書），避免溫差導致冷凝水影響反應。
已分裝試劑：
若需冷凍保存（如-20℃），提前取出置于2-8℃緩慢解凍，避免直接常溫解凍。
（2）器材準備
耗材要求：
使用無酶、無內毒素污染的耗材（如進口ELISA專用吸頭、一次性EP管、96孔板等）。
槍頭盒需滅菌處理，避免交叉污染。
儀器校準：
提前預熱酶標儀（37℃），校準波長（通常450 nm或廠家指定波長）。
洗板機檢查：確保吸液充分，殘留液≤5μL/孔。
（3）標準品配制
梯度稀釋：
按說明書用“標準品稀釋液”逐級稀釋（如1:2或1:10），混勻后立即使用。
示例：原液濃度100 EU/mL→50→25→12.5 EU/mL等。
注意事項：
每級稀釋后輕輕拍打混勻，避免氣泡產(chǎn)生。
最后一管作為空白對照（如PBS或專用稀釋液）。
